作者：余满堂，王晓勤，陈秋红，刘世明，吴天一

【摘要】 目的 本文应用基因检测技术，了解不同群体基因频率、基因型频率及ACE基因特点与低氧调控基因（HIFG）的关系。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）基因扩增和聚丙烯酰胺凝胶（PAG）电移及基因序列测定技术，对高原世居藏族、蒙族、汉族和平原世居汉族四个群体血管紧张素转换酶基因（ACE）多态性的研究。结果 测得基因频率为高原汉族0.6562、藏族0.6377、蒙族0.6505和平原汉族0.7186，高原三个群体间差异无显著性，分别与平原比较差异有非常显著性（P＜0.001），基因型频率高原汉族为I/I 14%、I/D 11%、D/D 4%，藏族I/I 16%、I/D 10%、D/D 7%，蒙族I/I 14%、I/D 12%、D/D 6%，平原汉族 I/I 5%、I/D 3%、D/D 26%。显示高原三个群体基因型频率差异较小，这三个群体分别与平原人群比较差异有非常显著性（P＜0.001）。另外，在Wistar鼠HIF基因序列的490bp位点有ACE基因表达。结论 本研究为进一步研究高原人低氧适应的遗传机制提供了分子生物学依据。

【关键词】 藏族；蒙族；汉族；基因多态性；低氧

Study of gene polymorphism and hypoxia related gene on residents livin at high altitude and plain area

【Abstract】 Objective This paper researched angiotensin converting enzyme（ACE） gene polymorphism of Tibetan，Mongolian，Han Chinese residents living at high altitude and Han Chinese living at plain area.Methods Applying the technology of polymearse chain reaction（PCR） gene amplification and polyacrylamide gel（PAG） electric charge movement as well as gene sequencing，aims to understand the relationship between ACE gene frequency，ACE gene type frequency and ACE gene character with hypoxia inducible factor gene（HIFG）.Results Gene frequency is 0.6562，0.6377，0.6505 and 0.7186 in Han Chinese group，Tibetan group，Mongolian group at high altitude and Han Chinese at plain area respectively；there are not significant differences among three high altitude groups，but there is significant difference respectively compare to plain area（P＜0.001）.The gene type frequency is I/I 14%，I/D 11%，D/D 4% in Htan Chinese group at high altitude；I/I 16%，I/D 10%，D/D 7% in Tibetan group，I/I 14%，I/D 12%，D/D 6% in Mongolian group and I/I 5%，I/D 3%，D/D 26% in Han Chinese group at plain area；the result shows that there is minor difference among three high altitude groups，but there is significant difference respectively compare to plain are data（P＜0.001）.In addition，there is gene expression at 490bp point of gene sequence on Wistar rat.Conclusion This study provides molecular bioloic basis for further studying genetic mechanism of hypoxia adoptation of human beings at high altitude.

【Key words】 Tibetan；mongolian；Han Chinese；gene polymorphism；hypoxia

自然界的生物有多种多样，但每种生物的个体之间又存在着许多差异，一种生物群体尽管在整体水平上有它本身的相同的生物特性，可是在整体某一性状方面存在着个体差异，这种形状的差异科学家称为多态性现象（Polymorphism）。在青藏高原这块特殊的环境中，经过几千年来的繁育，形成了不同适应群体，在这些群体中逐步衍遗了复杂的基因表型的个体［1～3］。笔者应用检测STR基因座的位点多态数据为本底，对照研究ACE基因多态性，了解高原人群ACE基因多态位点变化规律及该基因与低氧的关系，为高原人类低氧适应机制的探讨提供依据。

1 资料与方法

1.1 受试对象 对海拔3550m地区，经体检正常者，选择无血缘关系的世居人群汉族39例，藏族31例，蒙族40例及平原世居汉族35例，分四个试验组，男女不限。

1.2 基因组DNA的制备 对受试个体抗凝外周血样5ml，经盐提法分别提取基因组DNA为世居汉族32份、藏族30份、蒙族29份和平原世居汉族34份，共提取收集DNA样本125份，见表1。

表1 DNA样本的来源

1.3 PCR检测STR基因多态性和ACE基因多态性 人类基因组DNA多态性是由于短串联重复序列（STR）为核心序列的重复次数不同而形成的。根据STR基因座突变率较低，稳定性好，易于标准化，能为人类群体遗传学提供丰富的高信息量遗传标记，以21号染色体中8个基因位点（D21S1432、D21S1435、D21S1270、D21S1440、D21S1446、GATA24H09、ATA42C09、GATA129D11）基因多态检测作本底，按照Hubert等发表的ACE基因结构，对应于ACE基因第16内含子中以ALUT序列设计引物；引物序列：ACE-F，5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3′；ACE-R，5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′。PCR反应体系：25μl体系中，基因组DNA 1.0μl，引物各10pmol，10xpcrbuffer 2.5μl，dNTP 2.5μl，TaqDNA聚合酶0.25u，PCR反应条件：95℃ 5min PCR仪开始循环（预变性）5min，相继94℃变性1min；退火温度55℃ 30s 及72℃ 15min延伸；循环30次（4℃保存）。将PCR产物在2%琼脂糖溴乙啶凝胶上电泳，在紫外灯下观察结果并照相。

1.4 统计学处理 采用Stata计算机软件，计算ACE基因I/I、I/D和D/D多态的基因型频率，确定其符合Hardy-Weinberg平衡，由基因型计算等位基因频率，组间频率用χ2检验。

2 结果

2.1 高原和平原环境四个群体21号染色体STR8个基因座基因多态性结果显示，高原汉族群体基因频率为13.44、藏族群体为21.68、蒙族群体为17.89，平原汉族14.02，高原汉族与平原汉族无群体差异，其他各群体之间差异有显著性。

　　本篇论文是由3COME文档频道的网友为您在网络上收集整理饼投稿至本站的，论文版权属原作者，请不要用于商业用途或者抄袭，仅供参考学习之用，否者后果自负，如果此文侵犯您的合法权益，请联系我们。

[1] [2] 下一页